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MS-MLPA的原理
發(fā)布時(shí)間： 2025-06-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 870次甲基化特異性MLPA (MS-MLPA) 是SALSA® MLPA®®技術(shù)的一種變體。通過MS-MLPA，可以同時(shí)對(duì)多個(gè)目標(biāo)進(jìn)行半定量的甲基化分析。
MS-MLPA 探針
如同常規(guī)MLPA探針混合物，MS-MLPA探針混合物包含靶向特定基因組序列的探針。每個(gè)探針由兩部分組成：左探針寡核苷酸（LPO）和右探針寡核苷酸（RPO）。MS-MLPA探針混合物中的某些探針靶向包含甲基化敏感性HhaI內(nèi)切酶限制位點(diǎn)的區(qū)域。這些探針可用于甲基化分析。
MS-MLPA的原理
探針與樣品DNA上的目標(biāo)序列雜交。然后使用HhaI酶消化未甲基化的雙鏈探針-DNA復(fù)合物。
與未甲基化樣本DNA形成的復(fù)合物會(huì)被消化。消化后的探針無(wú)法呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，因此不會(huì)產(chǎn)生信號(hào)。與甲基化樣本DNA形成的復(fù)合物不會(huì)被HhaI消化，并將產(chǎn)生正常信號(hào)。
MS-MLPA 反應(yīng)
MS-MLPA 的步驟與MLPA的步驟非常相似。重要的區(qū)別是反應(yīng)在過夜雜交后被分為未消化和已消化的反應(yīng)。
未消化的反應(yīng)用于拷貝數(shù)測(cè)定。在消化反應(yīng)中，用于甲基化分析，HhaI酶與Ligase-65酶同時(shí)加入。
數(shù)據(jù)分析
Coffalyser™ 用于分析數(shù)據(jù)。拷貝數(shù)與常規(guī) MLPA 的方法相同，通過未消化反應(yīng)來確定。DNA 樣品中的甲基化百分比是通過將消化反應(yīng)中的每個(gè)探針信號(hào)與未消化反應(yīng)中的相應(yīng)信號(hào)進(jìn)行比較來確定的。
完成
對(duì)您的MLPA數(shù)據(jù)進(jìn)行完整分析。
質(zhì)量
對(duì)您的樣品和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行廣泛的的質(zhì)量控制。
Coffalyser™ 是 免費(fèi)的、用戶友好型 MLPA 分析軟件，由 MRC Holland 開發(fā)和支持，幫助您充分利用您的數(shù)據(jù)。
高級(jí)質(zhì)量控制
一個(gè)專為MLPA設(shè)計(jì)的高級(jí)質(zhì)量檢查系統(tǒng)幫助您評(píng)估從片段分離的質(zhì)量和MLPA反應(yīng)到參考樣品的再現(xiàn)性的一切內(nèi)容。這些檢查有助于防止您基于不良數(shù)據(jù)得出結(jié)論，并提高您對(duì)結(jié)果可靠性的信心。
可視化您的數(shù)據(jù)的所有方面
Coffalyser 允許您以多種方式可視化和分析您的數(shù)據(jù)。您可以查看電泳圖、表格，或?qū)Ｗ⒂趲в锌截悢?shù)比率的圖表。對(duì)于更復(fù)雜的病例和故障排除，您可以查看中間分析步驟的結(jié)果。要討論或存儲(chǔ)您的結(jié)果，您可以將總結(jié)導(dǎo)出為 PDF。
獲取新信息
關(guān)于我們的產(chǎn)品的新信息可以直接從Coffalyser內(nèi)部從我們的服務(wù)器獲取。這確保了您在收到新產(chǎn)品后即可開始分析。Coffalyser的更新始終是免費(fèi)的，確保您始終從新的見解中受益。
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分析證書
COA 版本 04；發(fā)布于 2021 年 5 月 28 日
SALSA MLPA
SALSA® MLPA® 試劑盒分析證書
目錄編號(hào)
產(chǎn)品名稱
SALSA MLPA 試劑盒
規(guī)格
100、500 或 2000 次反應(yīng)
運(yùn)輸條件
干冰或冷卻元件
儲(chǔ)存條件
到貨后存放在 - 25°C 至 - 15°C 之間
有效期
MLPA 試劑有效期：見附錄 A（在推薦條件下儲(chǔ)存時(shí)）。本產(chǎn)品凍融次數(shù)不得超過 25 次
用途
本試劑盒僅用于與 SALSA（MS-）MLPA 探針組合結(jié)合，按（MS-）MLPA 通用協(xié)議進(jìn)行（MS-）MLPA 分析
質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)
- 使用專用質(zhì)量控制探針組合測(cè)試雜交速度、連接酶 - 65 活性和聚合酶活性。新舊批次之間的引物峰變異 < 20%。參考樣本群體內(nèi)和樣本群體內(nèi)的變異 < 10%（大標(biāo)準(zhǔn)差 0.10）。殘留引物 % 低于 40%。專用測(cè)試探針的探針比率在 0.8-1.2 之間。無(wú) DNA 反應(yīng)僅顯示 64、70、76 和 82 nt 的對(duì)照片段。
- 通過使用與 PCR 引物具有廣泛同源性的 LPO 混合物，對(duì) PCR 引物混合物進(jìn)行類似引物二聚體的峰形成測(cè)試。類似引物二聚體的峰低于探針峰平均高度的三倍。
- 對(duì)連接酶緩沖液 B 進(jìn)行批次間電導(dǎo)率變異測(cè)試，變異 < 10%。
- 使用 5 ng DNA 對(duì)引物峰變異進(jìn)行測(cè)試（不適用于連接酶緩沖液 A 和連接酶 - 65）。變異應(yīng)≤20%。
- 穩(wěn)定性測(cè)試（在 37°C 下孵育 1 周）。新舊批次之間的引物峰變異 < 20%。參考樣本群體內(nèi)和樣本群體內(nèi)的變異 < 10%（大標(biāo)準(zhǔn)差 0.10）。殘留引物 % 低于 40%。專用測(cè)試探針的探針比率在 0.8-1.2 之間。無(wú) DNA 反應(yīng)僅顯示 64、70、76 和 82 nt 的對(duì)照片段。傾斜度 < 60%。測(cè)試結(jié)果
合格
本證書是生產(chǎn)過程中的分析聲明。所有檢測(cè)均按照制造商的使用說明進(jìn)行。本 COA 是適用于所有 SALSA MLPA 試劑盒批次的通用證書。有關(guān)批次詳情，請(qǐng)見附錄 A
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